Preparación de Reactivos
Recetas de las soluciones y reguladores usados en los protocolos del laboratorio, agrupadas por práctica de origen. Esteriliza en autoclave (15 lb/in², 20 min) donde se indique, y usa agua destilada o desionizada salvo que se especifique lo contrario.
Soluciones generales
EDTA 0.5 M, pH 8.0
93.05 g de Na₂EDTA·2H₂O en 300 mL de agua. Ajustar pH a 8.0 con NaOH 10 M (~25 mL): el EDTA no se disuelve hasta pH ≈ 7.0. Aforar a 500 mL y autoclavar.
MgCl₂ 1 M
203.3 g de MgCl₂·6H₂O en 800 mL de agua; aforar a 1 L. Autoclavar en alícuotas.
Fenol-cloroformo
Mezclar volúmenes iguales de fenol y cloroformo; equilibrar con varias extracciones de Tris-Cl 0.1 M pH 7.6. Almacenar a 4 °C en botellas ámbar bajo una capa de Tris-Cl 0.01 M. Precaución: el fenol es altamente corrosivo — guantes y lentes.
PBS (regulador de fosfatos)
8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.44 g Na₂HPO₄ y 0.24 g KH₂PO₄ en 800 mL de agua. Ajustar pH a 7.4 con HCl, aforar a 1 L, autoclavar 20 min.
Etanol al 70%
70 mL de etanol absoluto + 30 mL de agua desionizada estéril. Conservar en refrigeración.
TAE 50X
242 g de Tris base en 300 mL de agua + 57.1 mL de ácido acético glacial + 100 mL de EDTA 0.5 M pH 8.0. Aforar a 1 L.
TPE 10X
108 g de Tris base en 400 mL de agua + 15.5 mL de ácido fosfórico al 85% + 40 mL de EDTA 0.5 M pH 8.0. Aforar a 1 L.
Regulador alcalino 1X
A 200 mL de agua añadir 5 mL de NaOH 10 N y 2 mL de EDTA 0.5 M pH 8.0. Aforar a 1 L.
Tris-glicina 5X (SDS-PAGE)
15.1 g de Tris base + 94 g de glicina + 50 mL de SDS 10% (pH 8.0) en 500 mL de agua. Aforar a 1 L.
Extracción de DNA (total y plasmídico)
Caldo LB
10 g de triptona, 5 g de extracto de levadura, 5 g de NaCl; ~500 mL de agua + 1 mL de NaOH 1 N. Aforar a 1 L y autoclavar.
Agar LB (placas)
Igual que el caldo + 15 g de agar bacteriológico. Autoclavar, vaciar ~20 mL por caja Petri y secar 3 días a temperatura ambiente (o 1 h a 37 °C con la tapa entreabierta).
TE 10X
0.5 mL de Tris-Cl 2 M pH 7.4 + 0.2 mL de EDTA 0.5 M pH 8.0 + 99.48 mL de agua. Autoclavar.
Tris 2 M, pH 7.4
242.2 g de Tris base en 700 mL de agua; ajustar pH con ~140 mL de HCl concentrado. Aforar a 1 L y autoclavar.
GTE (glucosa 50 mM, Tris 25 mM, EDTA 10 mM)
0.5 mL de Tris 1 M + 0.4 mL de EDTA 0.5 M + 1 mL de glucosa al 18% + 18 mL de agua estéril. Conservar en refrigeración.
Lisis alcalina (NaOH 0.2 M, SDS 1%)
1 mL de NaOH 2 M + 1 mL de SDS 10% + 8 mL de agua.
NaOH 2 M
8 g de NaOH, con mucho cuidado, en volumen final de 100 mL de agua.
SDS 10%
100 g de SDS en 800 mL de agua (a 50 °C disuelve más rápido); ajustar pH 7.0 con HCl y aforar a 1 L. Usar mascarilla al pesar: no inhalar el polvo. No requiere esterilización.
Acetato de potasio (K⁺ 3 M, acetato 5 M)
29.4 g de acetato de potasio + 11.5 mL de ácido acético glacial; aforar a 100 mL.
Acetato de potasio 5 M, pH 4.8
122.68 g en 200 mL de agua; ajustar pH a 4.8 con ácido acético y aforar a 250 mL.
Fenol saturado
Equilibrar fenol recién fundido con Tris-Cl 2 M pH 7.4 (dos veces), dejando una capa acuosa final cubriendo el fenol. Conservar en frasco ámbar, en frío.
RNasa 10 mg/mL
50 mg de RNasa pancreática en 5 mL de agua estéril; hervir 30 min para inactivar DNasas residuales. Aliquotar y guardar a −20 °C.
Proteinasa K 20 mg/mL
20 mg en 1 mL de agua bidestilada estéril.
Electroforesis y restricción
TBE 10X
54.45 g de Tris base + 27.8 g de ácido bórico + 25 mL de EDTA 0.5 M pH 8.0 en 150 mL de agua; aforar a 250 mL. (Versión 1 L: 80 g Tris, 55 g ácido bórico, 9.3 g EDTA.)
Agarosa 1% / 1.2% / 1.5% / 2%
0.35 / 0.42 / 0.525 / 0.7 g de agarosa en 35 mL de TBE 0.5X; calentar a ebullición en microondas sin sobrecalentar. Usar guantes: el gel caliente quema.
Regulador de carga
0.03 g de azul de bromofenol en 10 mL de agua + 60 mL de glicerol; aforar a 100 mL y esterilizar por filtración. (Versión 6X: 0.25 g de bromofenol + 0.25 g de xileno cianol + 30 mL de glicerol, aforar a 100 mL.)
Regulador para EcoRI 10X
Tris-HCl 1 M, NaCl 500 mM, MgCl₂ 100 mM, Tritón X-100 0.25%, pH 7.5.
Bromuro de etidio (solución de tinción)
5 µL de EtBr 10 mg/mL en 100 mL de TBE 0.5X. Carcinógeno: guantes siempre, desecho en recipiente etiquetado, nunca a la tarja.
Clonación en E. coli
LB + ampicilina + X-Gal (placas)
Preparar agar LB y añadir ampicilina y X-Gal hasta 50 µg/mL final de cada uno.
Ampicilina 4 mg/mL (stock)
40 mg de ampicilina base en 10 mL de agua estéril (condiciones de esterilidad). Conservar a 4 °C. Final en placas/medio: 50 µg/mL.
X-Gal 50 mg/mL (stock)
500 mg en 10 mL de N,N′-dimetilformamida. Añadir el volumen necesario para 50 µg/mL finales.
CaCl₂ 0.1 M
2.77 g de CaCl₂ en 250 mL de agua bidestilada. Estéril y frío para las células competentes.
PCR
MgCl₂ 50 mM
0.48 g de MgCl₂ en 100 mL de agua bidestilada.
RNA
Agua tratada con DEPC 0.1%
0.1 mL de dietil pirocarbonato en 99.9 mL de agua; incubar a 37 °C durante 1 h y autoclavar (destruye el DEPC residual). El DEPC es un alquilante: manejar en campana.
Acetato de sodio 1 M
8.2 g de acetato de sodio en 80 mL de agua bidestilada; aforar a 100 mL.
Recetas del Apéndice I del manual de laboratorio. Verifica las concentraciones de los stocks comerciales antes de calcular diluciones — usa la calculadora de Diluciones.