Calculadoras de Laboratorio

Lo esencial a calcular.

Master Mix de PCR

Volumen por reacción (µL)Nº de reaccionesFactor de pérdida (%)

Reactivo	Stock	Final	µL/reacción	Master Mix (×8.8)
Buffer 10X	X	X	5.0	44.0
MgCl₂omitir si el buffer ya lo incluye	mM	mM	1.5	13.2
dNTPs (10 mM c/u)	mM	mM	1.0	8.8
Primer Forward	µM	µM	2.5	22.0
Primer Reverse	µM	µM	2.5	22.0
Taq polimerasa (5 U/µL)	—	—	0.3	2.2
ADN molde	—	—	1.0	8.8
Agua nuclease-free	—	—	36.3	319.0
TOTAL	—	—	13.8	121.0 µL

Simulador de qPCR

Copias InicialesEficiencia (%)Presencia de Primer Dimers

Curva de Amplificación

Curva de Melting

Tm y Ta de Primers

Primer Forward (5'→3')Primer Reverse (5'→3')

Primer (nM)Na⁺/K⁺ (mM)Mg²⁺ (mM)dNTP (mM)

Forward

Longitud: 21 nt
%GC: 47.6%
Tm NN: 58.8 °C

Reverse

Longitud: 20 nt
%GC: 50.0%
Tm NN: 61.6 °C

Ta estimada: 55.8 °C (Tm más baja − 3 °C)

Diseño Automático de Primers

Genera pares de primers óptimos (Tm, %GC, Hairpins) para amplificar tu gen.

Secuencia Objetivo de ADN

Tamaño de amplicón deseado (bp)

Ligación: Vector : Inserto

Masa de vector (ng)Tamaño del vector (bp)Tamaño del inserto (bp)

Ratio molar (inserto:vector)	Masa de inserto (ng)
1:1	16.67
2:1	33.33
3:1 punto de partida habitual	50.00
5:1	83.33

Asume concentraciones molares iguales. Para ligaciones de extremos rombos o degradación de inserto, prueba ratios 5:1–10:1.

Preparación de Soluciones

Diluciones (C₁V₁ = C₂V₂)

C₁ (Stock)× V₁ =C₂ (Final)×V₂ (Final)

Tomar 10.00 unidades de volumen del stock, y llevar a 100 unidades totales con solvente.

Gel de Agarosa

% (w/v)Volumen (mL)

Pesar 0.50 g de agarosa y disolver en 50 mL de buffer (TAE/TBE).

Receta SDS-PAGE (Laemmli)

% Gel SeparadorVolumen Separador (mL)

Separador 10% (5 mL)

H₂O: 1.98 mL
Acrilamida (30%): 1.67 mL
Tris 1.5M pH 8.8: 1.25 mL
SDS 10%: 50.0 µL
APS 10%: 50.0 µL
TEMED: 2.5 µL

Concentrador 4% (2 mL)

H₂O: 1.19 mL
Acrilamida (30%): 0.27 mL
Tris 0.5M pH 6.8: 0.50 mL
SDS 10%: 20.0 µL
APS 10%: 20.0 µL
TEMED: 2.0 µL

Simulador de Electroforesis

% de agarosaAvance de la corrida (75%)

1 kb12 fragmentos

Muestra 1

Rango de resolución a 1%: 500–10.000 bp. Fragmentos fuera del rango se saturan (arriba o abajo) — como en la realidad, cambia el % de gel. Frentes de colorante según tablas publicadas (TAE 1x).

Control de Calidad Espectrofotométrico (NanoDrop)

Ácido NucleicoAbs 260Abs 280Abs 230Factor de Dilución

Concentración

50.0 ng/µL

Ratio 260/280

1.82

Ratio 260/230

2.22

Muestra Óptima

Los ratios de pureza se encuentran en el rango ideal para ensayos downstream (PCR, secuenciación, clonación).